hipòtesi general
Abans de començar a realitzar els experiments es va redactar una hipòtesi, al mateix temps que es redactava el protocol. A trets generals, basant-nos en el funcionament de les substàncies estudiat anteriorment es prediu que observarem en els cobres que representen cada pouet, o sigui unes condicions diferents.
1. Control: hi haurà un percentatge mitòtic molt baix.
2. Nocodazole: microtúbuls despolimeritzats i mitosi estancada en prometafase.
3. Nocodazole i despres rentar:
-30 min: metafase
-Anafase i telofase
El Nocodazole frenarà la mitosi perquè no podran construir el fus mitòtic. En canviar el medi i, per tant, eliminar el Nocodazole, els microtúbuls tornaran a créixer i les cèl·lules avançaran la mitosi a la vegada, estaran sincronitzades.
4. Nocodazole, rentar i Taxol: no es pot determinar la fase, dependrà del temps que passi, segurament serà Metafase, Anafase o Telofase. El fus mitòtic tindrà microtúbuls astrals molt llargs fent que el fus es col·lapsi
5. Nocodazole, rentar i MG132: les cèl·lules es trobaran en metafase.
MG132 ha d’impossibilitar el pas de la metafase a l’anafase perquè no deixarà que la ciclina B es degradi.
6.STLC, totes les cèl·lules hauran fet un fus amb només un pol, fus monopolar. Els centrosomes no s’han de poder separar perquè el STLC inhibeix la cinesina Eg5.
1. Control: hi haurà un percentatge mitòtic molt baix.
2. Nocodazole: microtúbuls despolimeritzats i mitosi estancada en prometafase.
3. Nocodazole i despres rentar:
-30 min: metafase
-Anafase i telofase
El Nocodazole frenarà la mitosi perquè no podran construir el fus mitòtic. En canviar el medi i, per tant, eliminar el Nocodazole, els microtúbuls tornaran a créixer i les cèl·lules avançaran la mitosi a la vegada, estaran sincronitzades.
4. Nocodazole, rentar i Taxol: no es pot determinar la fase, dependrà del temps que passi, segurament serà Metafase, Anafase o Telofase. El fus mitòtic tindrà microtúbuls astrals molt llargs fent que el fus es col·lapsi
5. Nocodazole, rentar i MG132: les cèl·lules es trobaran en metafase.
MG132 ha d’impossibilitar el pas de la metafase a l’anafase perquè no deixarà que la ciclina B es degradi.
6.STLC, totes les cèl·lules hauran fet un fus amb només un pol, fus monopolar. Els centrosomes no s’han de poder separar perquè el STLC inhibeix la cinesina Eg5.